1.孕激素试验 判断卵巢有无雌激素分泌可行孕激素试验。　　方法：每天肌肉注射黄体酮20mg，用3天，或每天肌内注射10mg，用5天;亦可每天口服甲地孕酮5mg，用5天。　　若停药后3～7天出现阴道出血，表明该妇女体内有一定的雌激素，为Ⅰ度闭经;若无出血则为阴性，可能因为体内雌激素水平极低、子宫内膜增生不良，子宫内膜被破坏或缺如(如严重子宫内膜结核病、宫腔粘连或幼稚型子宫等)。　　2.雌激素试验 孕激素试验阴性者可以行雌激素试验，以确定孕激素试验阴性原因是否为雌激素水平低下。　　方法：口服己烯雌酚1mg/d，共20天，停药后阴道出血为Ⅱ度闭经，表明体内雌激素水平低下。其病因在卵巢、垂体或下丘脑功能不良。若做GnRH垂体兴奋试验后阴道无出血，则可明确子宫性闭经。　　3.FSH、LH、PRL测定 适当时测定血中的各种激素水平，可获得卵巢的功能状态及其影响环节等方面较多的信息，检测血清中FSH、LH、PRL、E2可以鉴别卵巢或垂体性排卵障碍于闭经。如确定卵巢是否已丧失分泌雌激素的能力，或因缺乏促性腺激素而卵巢不分泌甾体激素。用放射免疫法测定促性腺激素，按血清FSH、LH、PRL、E2值来鉴别卵巢或垂体性排卵障碍与闭经(表1)。　　　　(1)PRL：正常值为0～20?g/L，PRL>25?g/L，而FSH/LH水平低，则属高催乳素血症(hyperprolactinemia)，PRL升高时应进一步作头颅X线摄片或CT检查，排除垂体肿瘤。　　(2)月经周期中FSH正常值为5～20U/L，LH为5～25U/L。　　①FSH、LH值>40U/L，可能的情况有：卵巢功能障碍，卵巢早衰，或卵巢发育不全，卵巢不敏感综合征，分泌促性腺激素的肿瘤，17-羟化酶缺乏引起的原发性闭经等。对原发性闭经患者，应作染色体核型分析及分带检查。　　②LH>25U/L而FSH值正常、E2偏高或正常，特别是LH/FSH>3时，则可能为多囊卵巢综合征，这时测定雄激素可发现雄烯二酮常上升。　　③FSH，LH均　　4.GnRH垂体兴奋试验 GnRH垂体兴奋即LHRH试验，它可以区别下丘脑或垂体性闭经，提示GnRH治疗反应。　　方法：3ml生理盐水加入50?g 10肽GnRH静脉推注。分别取注射前后15，30，60和120min的血清测LH。LH峰值出现在用药后15～30min，峰值出现在用药后15～30min且绝对值增加 7.5?g/L以上或LH较用药前增高3倍以上为正常反应，垂体功能良好;峰值出现在用药后60～90min为延迟反应;若LH基值低，在6?g/L以下，用药后增加值低于基值2倍为低反应。　　结果分类：①用药前FSH、LH低或正常，用药后反应正常为下丘脑功能不全型;②用药前FSH、LH低，用药后无反应为垂体功能不全型;③用药前FSH、LH基值大于30U/L，用药后垂体过度反应，为卵巢功能不全型，提示卵巢性闭经;④用药前LH高，为FSH一倍，用药后LH为过度反应，用药前FSH低或正常，用药后反应正常为多囊卵巢综合征。　　5.克罗米酚试验 克罗米酚试验方法：Ⅰ度闭经者在停药后阴道出血第5天口服克罗米酚，50～100mg/d，共5天。阳性提示轻度下丘脑型闭经。　　克罗米酚可用于判断发育迟缓女性的生殖轴是否正常。　　6.促性腺激素试验 克罗米酚试验阴性，孕激素试验或雌激素试验阳性。于撤药阴道出血后第5天肌注HMG 70～150U/d，在连续用药过程中监测排卵，卵泡成熟时，再肌注HCG 5000～10000U/d，有排卵为促性腺激素试验阳性。　　7.ACTH兴奋试验 ACTH 20mg，肌注，分别测用药前、后24h尿17-酮类固醇和17-羟类固醇排泄量。PCOS者反应正常，而肾上腺皮质功能异常者17-酮类固醇和17-羟类固醇均明显增高。　　8.地塞米松抑制试验 适用于闭经男性化患者。地塞米松0.5mg，每6小时1次，共2天或7天，比较用药前尿17-酮类固醇，17-羟类固醇，血睾酮，血脱氢表雄酮等变化。若垂体-肾上腺皮质轴功能正常，则用药后由于负反馈作用，抑制ACTH，尿17-酮类固醇和17-羟类固醇值降低。但Cushing综合征、肾上腺皮质肿瘤患者则不降低。　　9.促甲状腺素释放素(TRH)刺激试验 TRH为一种三肽，能刺激垂体细胞，分泌促甲状腺素与催乳素患者先排尿，卧床休息20min，将100?g TRH溶于生理盐水中快速静脉注射在5，10，15，30与60min抽血作测定，15min内催乳素(PRL)如比基值高5～10倍，此类患者有高催乳素血症的倾向。一般PRL150?g/L为过度反应。